影響電泳加工質(zhì)量的因素分析

1．電泳介質(zhì)的pH值東莞電泳加工溶液的pH值決定帶電物質(zhì)的解離程度，也決定物質(zhì)所帶凈電荷的多少.對(duì)蛋白質(zhì)，氨基酸等相似兩性電解質(zhì)，pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)，粒子所帶電荷越多，泳動(dòng)速度越快，反之越慢。因而，當(dāng)別離某一種混合物時(shí)，電泳加工應(yīng)選擇一種能擴(kuò)大各種蛋白質(zhì)所帶電荷量差其他pH值，以利于各種蛋白質(zhì)的有用別離.為了確保電泳過程中溶液的pH值安穩(wěn)，有必要采用緩沖溶液。

2.緩沖液的離子強(qiáng)度溶液的離子強(qiáng)度（Ionintensity）是指溶液中各離子的摩爾濃度與離子價(jià)數(shù)平方的積的總和的1/2.帶電顆粒的遷移率與離子強(qiáng)度的平方根成反比。低離子強(qiáng)度時(shí)，遷移率快，但離子強(qiáng)度過低，緩沖液的緩沖容量小，不易保持pH安穩(wěn).高離子強(qiáng)度時(shí)，遷移率慢，但電泳譜帶要比低離子強(qiáng)度時(shí)細(xì)窄。一般溶液的離子強(qiáng)度在0.02～0.2之間。不同帶電顆粒，因其所帶電荷的性質(zhì)和多少、形狀和巨細(xì)等差異，使其在同一電場(chǎng)強(qiáng)度、相同的支撐介質(zhì)和緩沖液的條件下，各自的泳動(dòng)速度不同，然后使各種不同的帶電顆粒如蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子得以別離。帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度以遷移率(mobility)表明。故遷移率可定義為帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的泳動(dòng)速度，是指在1V／m的電場(chǎng)效果下，帶電顆粒每秒鐘移動(dòng)的間隔(m)，其移動(dòng)速率為m／s，遷移率以m2／(V?s)表明。而在實(shí)踐使用中以cm2／(V?s)表明，因而經(jīng)過測(cè)量d、l、V、t，便可核算遷移率。I=1/2∑CiZi2(I：離子強(qiáng)度；Ci：離子的摩爾濃度；Zi：離子價(jià)數(shù).)0.154MNaCl溶液的離子強(qiáng)度為：I=1/2(0.154×12+0.154×12)=0.1540.015MNa2SO4溶液的離子強(qiáng)度為：I=1/2(0.015×2×12+0.015×22)=0.045

3．電場(chǎng)強(qiáng)度東莞電泳加工電場(chǎng)強(qiáng)度（電勢(shì)梯度Electricfieldintensity）是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度）.電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳速度起著正比效果，電場(chǎng)強(qiáng)度越高，帶電顆粒移動(dòng)速度越快。依據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求，電泳可分為兩種：一種是高壓電泳，所用電壓在500～1000V或更高.因?yàn)殡妷焊?，電泳時(shí)間短（有的樣品需數(shù)分鐘），適用于低分子化合物的別離，如氨基酸，無機(jī)離子，包括部分聚焦電泳別離及序列電泳的別離等。因電壓高，產(chǎn)熱量大，有必要裝有冷卻設(shè)備，不然熱量可引起蛋白質(zhì)等物質(zhì)的變性而不能別離，還因發(fā)熱引起緩沖液中水分蒸騰過多，使支撐物（濾紙，薄膜或凝膠等）上離子強(qiáng)度增加，以及引起虹吸現(xiàn)象（電泳槽內(nèi)液被吸到支撐物上）等，都會(huì)影響物質(zhì)的別離.另一種為常壓電泳，產(chǎn)熱量小，室溫在10～25℃別離蛋白質(zhì)標(biāo)本是不被損壞的，無需冷卻設(shè)備，一般別離時(shí)間長(zhǎng)。電場(chǎng)強(qiáng)度是指每1厘米的電位降，故又稱電位梯度，以V／cm表明。電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)泳動(dòng)速度起決定性效果。在必定范圍內(nèi)，電場(chǎng)強(qiáng)度愈高，帶電顆粒泳動(dòng)愈快，依據(jù)不同電泳所需電場(chǎng)強(qiáng)度，可分為常壓電泳和高壓電泳。常壓電泳一般在100～500V，高壓電泳一般為500～10000V。紙電泳、醋酸纖維電泳、聚丙烯酰胺和瓊脂糖凝膠電泳只需200～500V,而固相pH值梯度等電聚焦電泳則需求3000～5000V高壓。電壓與支撐介質(zhì)的長(zhǎng)度有關(guān)，而電流與支撐介質(zhì)的橫截面(或?qū)挾?成正比。大部分電泳用恒壓控制電場(chǎng)強(qiáng)度。在做管狀圓盤電泳時(shí)，一般用調(diào)節(jié)每管的電流(mA)控制電場(chǎng)強(qiáng)度，在電泳過程中，保持安穩(wěn)的電場(chǎng)強(qiáng)度或安穩(wěn)的電流，是電泳成功與否的重要條件。

4．電滲現(xiàn)象東莞電泳加工在電場(chǎng)中液體關(guān)于一個(gè)固體的固定相相對(duì)移動(dòng)稱為電滲.在有載體的電泳中，影響電泳移動(dòng)的一個(gè)重要因素是電滲。常遇到的情況是γ-球蛋白，由原點(diǎn)向負(fù)極移動(dòng)，這是電滲效果所引起的倒移現(xiàn)象.發(fā)生電滲現(xiàn)象的原因是載體中常含有可電離的基團(tuán)，如濾紙中含有羥基而帶負(fù)電荷，與濾紙相觸摸的水溶液帶正電荷，液體便向負(fù)極移動(dòng)。因?yàn)殡姖B現(xiàn)象往往與電泳同時(shí)存在，所以帶電粒子的移動(dòng)間隔也受電滲影響；如電泳方向與電滲相反，則實(shí)踐電泳的間隔等于電泳間隔加上電滲的間隔.瓊脂中含有瓊脂果膠，，其中含有較多的硫酸根，所以在瓊脂電泳時(shí)電滲現(xiàn)象很明顯，許多球蛋白均向負(fù)極移動(dòng)。除去了瓊脂果膠后的瓊脂糖用作凝膠電泳時(shí)，電滲大為減弱.電滲所造成的移動(dòng)間隔可用不帶電的有色染料或有色葡聚糖點(diǎn)在支撐物的中心，以調(diào)查電滲的方向和間隔。

5．分子篩效應(yīng)在不同濃度和交聯(lián)度的凝膠中，其孔徑巨細(xì)不同，經(jīng)過分子篩效應(yīng)可將不同巨細(xì)的顆粒進(jìn)行別離，其別離機(jī)制是小分子經(jīng)過凝膠微孔，而大分子顆粒難經(jīng)過微孔而使遷移阻滯，然后將被別離的顆粒，按分子巨細(xì)的順序排列進(jìn)行別離。